Дослідження методом пцр на віч. Через який час після зараження віч покаже аналіз крові, терміни, результати, види аналізів

Для більшості жінок та чоловіків це венеричне захворювання викликає найбільше побоювання. З цієї причини після випадкового інтимного зв'язку без бар'єрної контрацепції, а також при частій зміні статевих партнерів і після хірургічних операцій, розумна людина відчуває певну настороженість. Самий надійний спосібвнести ясність – це звернутися до клініки та здати ПЛР аналіз на ВІЛ.

Тест по крові можна використовувати для визначення наступних показників:

• Спростування/підтвердження наявності ВІЛ у латентний період (у перші тижні після зараження антитіла в аналізах ІФА не виявляються через їхню відсутність або надто низьку концентрацію).
• Визначення генотипу ВІЛ-1, ВІЛ-2.
• Виявлення статусу у дітей, які народилися від матерів-носіїв (антитіла до ВІЛ тривалий час виявляються у всіх дітей, народжених від ВІЛ-інфікованих жінок. Визначення ДНК вірусу у дітей бажано проводити у віці до 48 годин життя, 1-2 місяці, 3- 6 місяців).
• Хибнонегативні, хибнопозитивні та сумнівні результати ІФА тестів.
• Діагностика кількості ВІЛ та контроль за зміною вірусного навантаження в динаміці (у разі вже встановленого діагнозу СНІД аналіз методом ПЛР використовується для прогнозу, динамічного спостереження та моніторингу терапії, що проводиться).

Ціна аналізу ПЛР на ВІЛ

АНАЛІЗ ПЛР НА ВІЛ - КОЛИ ЗДАЮТЬ, НАВІЩО І В ЯКІ ТЕРМІНИ

1. ДНК ВІЛ.Діагностика ДНК вірусу імунодефіциту людини може бути використана для раннього визначення можливого інфікування після випадку підвищеного ризику (аналізи крові здаються в термін, починаючи через 10-й день після потенційного інфікування). Однак для повного виключення інфекції, необхідно у подальшому проведення повторного дослідження та ІФА діагностики у терміни 4 та 12 тижнів.
   Результати аналізу: ДНК ВІЛ ( якісний аналіз) - "не виявлено" або "виявлено". В останньому випадку потрібні додаткові повторні дослідження для підтвердження ВІЛ-інфекції. При негативному результаті, але високому ризик інфікування, потрібно повторне обстеження - перездавання крові методом ПЛР або ІФА через деякий час.
2. РНК ВІЛ.Визначення РНК ВІЛ методомПЛР кількісний (так зване "вірусне навантаження") - один з показників для оцінки прогнозу перебігу ВІЛ-інфекції та ранній показник ефективності противірусної терапії. Тест показаний для моніторингу перебігу хвороби, вирішення питання початку терапії, оцінки її ефективності.
   Дослідження РНК ВІЛ методом ПЛР можна використовувати у дорослих при ранній достовірної діагностикиможливе інфікування після епізоду високого ризику (приблизно через 7-10 днів після ймовірного інфікування). Присутність високого титру РНК ВІЛ без антитіл дозволяє діагностувати гостру ВІЛ-інфекцію. Однак для уточнення діагнозу необхідне проведення повторного дослідження та ІФА діагностики у строки через 1 та 3 місяці.
   Здавання ПЛР РНК ВІЛ у вагітних з цією інфекцією за 3-4 тижні до передбачуваного терміну пологів показано для вирішення питання про метод розродження (через природні родові шляхи або шляхом кесаревого розтину).
   Результати аналізу: РНК ВІЛ HIV 1 типу (кількісний аналіз)- "не виявлено" (це в нормі).
3. Резистентність до ВІЛ.Аналіз на визначення резистентності ВІЛ до інгібіторів протеази та зворотної транскриптази показаний ВІЛ-інфікованим при неефективності терапії, що проводиться, а також у період гострої інфекціїперед початком противірусного лікування. Дослідження дозволяє визначити резистентність ВІЛ до лікарських препаратів. За результатами проведеного аналізу інфекціоніст дізнається про наявність мутацій стійкості до інгібіторів протеази, нуклеозидних та ненуклеозидних інгібіторів зворотної транскриптази, а також інформацію щодо кожної амінокислотної позиції, асоційованої з мутацією лікарської стійкості.
4. Мультипрайм комплексна діагностика:якісне визначення РНК вірусу гепатиту С/ДНК вірусу гепатиту В/РНК вірусу імунодефіциту людини (ВІЛ) 1 та 2 типу (ультрачутливий метод). Аналіз дозволяє проводити діагностику ВІЛ-інфекції, вірусних гепатитівС і В на ранніх термінах. Дослідження показано для раннього виявлення вірусних гепатитів В та С, ВІЛ 1/2 типу у осіб із групи ризику. Виявлення ДНК чи РНК вірусів свідчить про інфікування.

Терміни готовності даних аналізів крові – від 3 до 7 календарних днів. Здати якісний та кількісний аналіз ПЛР для діагностики ВІЛ-інфекціїу Москві можна у нашому медичному центрі. Взяття крові щодня, з 10-00, у тому числі на

Що нас обдурюють ВІЛ/СНІДом уже 30 років, це медичний факт, який давно вже не потребує жодних доказів. Я нікого не хочу ображати, але правда така, що зараз, маючи перед собою всю наявну інформацію про альтернативну точку зору, тобто представлену ВІЛ-дисидентами, просто неможливо продовжувати і далі наївно вірити в штучно створену і нав'язану за допомогою цинічної та брехливої пропаганди ВІЛ/СНІД-теорію.

Якщо ви висловлювали своє здивування з приводу того, що діагностичні тести на ВІЛ визначають не сам вірус, а тільки антитіла до нього, причому це відноситься не тільки до імуноферментного аналізу, але і до точнішого імунного блотингу, то напевно потім чули запевнення лікарів або деяких обізнаних людей у ​​тому, що є спосіб полімеразної ланцюгової реакції, який має відношення до антитіл, а виявляє саме сам вірус.
Чи чули про метод ПЛР-діагностики, і зокрема ВІЛ-інфекцію? Напевно. А чи пробували хоч трохи вникнути і розібратися? Ні? Отже, ясно, що нас дурять? Добре. Але зараз я покажу це наочно, на пальцях...

Так, нас справді нахабно і цинічно обдурюють, коли запевняють, що ПЛР-тест на ВІЛ визначає наявність самого вірусу чи його концентрацію у крові, тобто вірусне навантаження. І відразу скажу, що в цьому відношенні метод ПЛР не тільки нічим не відрізняється від ІФА та ІБ, але можна сказати прямо заснований на такому самому принципі.
Що це означає? Нагадаю, що діагностичні ВІЛ-тести ІФА та Імуноблот засновані на реакції антитіл у досліджуваному зразку з поміщеними в сам тест антигенами вірусу. Що там у тест-системах як ці ВІЛ-білки - одному Богу відомо, і те напевно далеко не все. Відповідно, зовсім незрозуміло, які антитіла вступають у реакцію з цими нібито ВІЛ-білками, в результаті чого наводиться список у 62 пункти про захворювання та стани, що викликають хибнопозитивну реакцію.

Що лежить в основі методу полімеразної ланцюгової реакції і яким чином відбувається діагностування на наявність інфекційних захворювань? У випадку з гепатитами та ВІЛ досліджується кров пацієнта. Щоб встановити присутність конкретного збудника захворювання в досліджуваному зразку крові, для ПЛР-тестування використовується праймер, тобто фрагмент ДНК самого збудника, комплементарний до специфічної ділянки його ДНК, тобто, по суті, праймер приєднується до ділянки ДНК так само, як з'єднуються між собою ділянки подвійний спіралі ДНК.
Уловлюєте? Береться ваша кров, потім до неї додається щось, що нібито безсумнівно є унікальною частиною геному ВІЛ-вірусу, додаються інші необхідні інгредієнти, потім разів тридцять все це нагрівається, то охолоджується, і в результаті - вуаля! ви ВІЛ-позитивні! ваше вірусне навантаження 3 мільйони! терміново починайте прийом терапії!

Але зачекайте. Хіба ви не бачите, як із самого початку вас обдурили?
Вас запевняли, що метод ПЛР виявляє сам вірус. Але це абсолютна брехня! Метод ПЛР у цьому відношенні нічим не відрізняється від ІФА та ІБ! Як там під виглядом ВІЛ-антигенів у тест-системах використовується невідомо що, так і в ПЛР-тестах під виглядом праймерів, що видаються за частину ДНК самого ВІЛ, так само використовується зовсім невідомо яка субстанція. Ви ж розумієте, що якщо ВІЛ не існує, то не може бути й мови про якесь ДНК ВІЛ, чи РНК ВІЛ, чи про антитіла до ВІЛ, зокрема материнських, якими нам трахкають мізки, розповідаючи, що вони є у всіх дітей від ВІЛ-позитивних матерів і самі собою зникають на другому році життя...

Ось так.
- Метод ПЛР виявляє сам вірус ВІЛ, тут не може бути жодних помилок та сумнівів! І цей найточніший метод показує вірусне навантаження, що дуже важливо для спостереження динаміки захворювання та його лікування!
- Ну-ну… Сам вірус кажеш? А що там використовується як праймер? Той самий вірус? Той самий, який Монтаньє та Галло відкрили 30 років тому? Чи правда вони його знайшли? Чи правда очистили? Щоправда, сфотографували? Чи правда довели, що він для реплікації/відтворення використовує Т-лімфоцити, внаслідок чого їхня загальна чисельність виснажується і настає небезпечний імунодефіцит? Це все правда?

І по суті метод ПЛР у спідології застосовується не так завдяки його винахіднику Кері Муллісу (скоріше навіть всупереч його думці!), як завдяки Монтаньє і Галло, які висмоктали з пальця ВІЛ, і ДНК-праймери якого використовуються при ПЛР-діагностиці ВІЛ...

Так що ось так ось. Якщо вам сказали, що за результатами ПЛР-тестування ви ВІЛ-позитивні, і ви маєте високе вірусне навантаження, або йдеться про вашу дитину - не хвилюйтеся ні секунди! вас нахабно обдурюють! Сам винахідник методу полімеразної ланцюгової реакції, мікробіолог Кері Мулліс, є ВІЛ-дисидентом, і він категорично проти використання ПЛР у ВІЛ-діагностиці, тому що добре розуміє, що у випадку з неіснуючим ВІЛ-вірусом це просто нахабний цинічний обман.

Ще момент. Ви чули про невизначене вірусне навантаження? Справа в тому, що далеко не у всіх ВІЛ-позитивних при тестуванні на кількість вірусу в крові виходить певний результат, який в залежності від величини вважається низьким або високим вірусним навантаженням. Якби таких людей було зовсім мало, про них взагалі не говорили б. Але річ у тому, що їх мабуть дуже багато, і тому й йдеться про невизначене вірусне навантаження при ВІЛ-інфекції. Я не згадуватиму про піар терапії, яка нібито знижує ВН до невизначеної. Ні, в тому й річ, що без всякої терапії у багатьох людей вона не визначається. Ніколи.
Тобто пацієнту поставлено діагноз ВІЛ-інфекція, але за допомогою знаменитого надчутливого космічно. точного методуПЛР-діагностики у його організмі неможливо знайти ВІЛ-вірус. Як же так?

І тоді нам кажуть, що метод звичайно унікальний, але сучасні технічні засоби таки накладають обмеження, і сааааміе маааалі кооооліїіічестваааа вііііруууссааа не мооогууут бути виявлені при ПЛР-діагностиці.

Тобто ВІЛ у пацієнта безперечно є. Вірус невиліковний, незнищенний, хитрий, підступний, злосливий, надзвичайно розумний і винахідливий. І навіть суперчарівний метод ПЛР не в змозі виявити, де там хитруючий вірус ховається від вчених та лікарів.
Виходить, що з одного боку нам розповідають, який чудовий і високоточний метод ПЛР, він де по одній молекулі може вгадати всього слона і навіть кита - а з іншого боку потувши очі долі нам невиразно мямлять про невизначене вірусне навантаження у тисяч пацієнтів, які десятки років живуть з діагнозом ВІЛ-інфекція та не приймають антиретровірусне лікування.

Такі справи. Дурять нас, як хочуть. А ви не будьте неляканими ідіотами. Не вірте на слово жодним лікарям та вченим. Вони вам тричі по сім коробів наговорять про космічну точність ПЛР-тестів, але лише одне зауваження про використовувані при цьому ВІЛ-праймери в момент і вщент розбивають всю чудову картину. Тому що заради сміху можна сказати, що як Галло запатентував перші ВІЛ-тести, коли відкрив фальшивий ВІЛ-вірус, так само він міг би запатентувати і ВІЛ-праймери для ПЛР-діагностики ВІЛ-інфекції, тому що праймери по суті те ж саме , що й антигени ВІЛ - деякі специфічні, властиві лише цьому вірусу біологічні субстанції (фрагменти геному чи специфічні білки)...

Спосіб лікування хвороби, спричиненої вірусом імунодефіциту людини, не знайдено досі. Натомість діагностика досягла серйозних успіхів. Аналіз на ВІЛ, виконаний методом ПЛР, – один із варіантів виявлення вірусу в організмі.

Полімеразна ланцюгова реакція, або ПЛР, - один з сучасних методівдіагностики ВІЛ У його основі лежить здатність нуклеїнових кислот до саморепродукції. Клітина будь-якого живого організму включає білок та нуклеїнові кислоти:

• РНК-рибонуклеїнову,
• ДНК-дезоксирибонуклеїнову.

Ці макромолекули зберігають генетичний код. Якщо концентрація вірусних клітин у крові низька, у пробі містяться не цілі ланцюжки ДНК, які окремі «цеглинки» – нуклеотиди. Полімеразна ланцюгова реакція виявляє навіть такі «уламки» вірусних клітин. Цей дозволяє отримати результат на ранніх термінах після можливого зараження, коли перші клінічні симптоми ще не з'явилися.

Найточніший результат можна отримати, використовуючи для аналізу венозну кров. Перед тим, як пройти обстеження, за пару днів . За 2 тижні припинити прийом імуностимулюючих препаратів.

Пробу біоматеріалу розщеплюють у медичному лабораторному реакторі. Потім фракції обробляють ферментами. Реактиви поєднуються з ДНК вірусної молекули та дублюють її. З однієї клітини виходить 2, з 2-х - 4, далі 8. Число зростає в геометричній прогресії. Ланцюгова реакція дозволяє в короткий термін збільшити кількість вірусного компонента і зробити його помітним для лаборантів.

Нормою є негативний результат аналізу, який має такий вигляд: «ДНК вірусу не виявлено». І це є референсное (середньостатистичне) значення.

Переваги та недоліки методики ПЛР при ВІЛ

Діагностика ВІЛ за допомогою ПЛР має незаперечні переваги, але є й суттєві недоліки. До перших відносяться:

• Висока точність. Вкрай мала ймовірність отримати хибнонегативні результати.
• Універсальність. Для дослідження підходить не лише кров, а й інші біологічні рідини(Піхвові виділення, сперма). Слина, сеча також використовуються, але точність результату буде нижчою. У цих середовищах концентрація вірусних клітин незначна.
• Широкий спектр аналізу. Один зразок біоматеріалу можна вивчити на кілька захворювань.
• Швидкість виконання. Полімеразна ланцюгова реакція відноситься до термінових методів діагностики. Відповідь можна дізнатися вже наступного дня.
• Достовірність становить 80%. За допомогою методу ПЛР можна виявити вірусні частинки, навіть якщо їхня концентрація невелика. Це дозволяє діагностувати захворювання на ранніх стадіяхта своєчасно розпочинати терапію.
• Рання діагностика ВІЛ-інфекції. Час, коли ВІЛ виявляють у крові за допомогою ПЛР – 10-14 днів після передбачуваного зараження. Це стандартний відрізок для діагностики вірусу імунодефіциту. цьому етапі ще виявляються; метод ІФА не працює.
• Нема вікових обмежень. Можна проводити це тестування дитині з народження.

Недоліки методу ПЛР при діагностиці ВІЛ:

• Вища вартість проти імуноферментним аналізом 3 покоління.
• Потрібне складне медичне обладнання.
• Похибка 20% через високу чутливість реакції. При аутоімунних захворюваннях, злоякісних пухлинах, хронічні інфекціїПЛР може дати хибнопозитивний результат.

Кому проводиться ПЛР

• Потрібна рання відповідь для попереднього діагностування. ПЛР допомагає підтвердити чи спростувати результати ІФА.
• Імуноблот дав позитивний результат. Якщо першим проводиться ПЛР аналіз, обов'язково підтвердження результату методом імунного блоттингу. Дослідження доповнюють одне одного. Використовуючи відразу два методи, медики виключають можливість помилок.
• Коли позитивний підтверджений, ПЛР допомагає відстежити ефективність терапії, що проводиться.
• Використовується для дослідження донорської крові на наявність.
• Проводити ПЛР можна навіть дітям до року. Цей метод застосовується для з'ясування ВІЛ-статусу новонароджених, мами яких є носіями вірусу. Тест, проведений у перші дні життя, покаже, чи відбулося внутрішньоутробне інфікування. Зараження могло статися, коли дитина проходила родовими шляхами. , Придбаний немовлям у процесі пологів, вдасться виявити через 2 - 3 тижні.

Скільки часу робиться аналіз ПЛР і де можна здати

Проведення аналізу ПЛР на ВІЛ та розшифрування результатів не потребує багато часу. Забір крові займає 5-7 хвилин. У стандартному випадку лаборанту достатньо 24 години, щоб підготувати довідку. Діагностування займає трохи більше 8 годин, решта часу потрібно оформлення. Пацієнт отримує звіт наступного робочого дня. виконують протягом 2 годин.

Дослідження на ВІЛ вказаним способом не проводять за полісом ЗМС. Отримати цю послугу безкоштовно у державній поліклініці не можна. Проте практично всі комерційні лабораторії зазвичай мають необхідне обладнання та реагенти. Проведення аналізу ПЛР часто входить до загального скринінгу на ВІЛ. Ціна комплексної діагностики становить від 600 до 1000 руб.

Пройти процедуру можна анонімно. У реєстратурі пацієнту дають індивідуальний номер, яким він дізнається результат. Сучасні медичні центри відображають усі дані на своєму сайті у особистому кабінетіклієнта.

Одним із найбільш точних та достовірних методів молекулярно – генетичної діагностики вважається ПЛР, тобто полімеразна ланцюгова реакція. Такий метод дозволяє діагностувати у пацієнта різні види захворювань спадкового та інфекційного характеру.

ПЛР - дослідження дозволяє діагностувати одне з таких складних захворювань, як те, що важко піддається лікування. Достовірність ПЛР на ВІЛ виправдовує себе лише у 80 випадках із 100.

Основним способом діагностики ВІЛ-інфекції в організмі людини вважається його крові, тобто проводитися тестування на це захворювання. Найпростішим та звичним способом діагностики є взяття венозної крові та проведення її у спеціальній лабораторії. Звичайно, отриманий позитивний результат може бути хибним, тому проводиться його повторна перевірка більш точним дослідницьким способом референц-лабораторії.

Полімеразна ланцюгова реакція на вважається досить дорогою процедурою, та її проведення потребує наявності спеціального обладнання та висококваліфікованих фахівців. Саме з цієї причини вона не набула широкого поширення серед населення.

Застосування ПЛР-аналізу для діагностики ВІЛ дозволяє отримати точний і достовірний результат наявності захворювання, проте, часто це залежить від підготовки самого пацієнта.

ПЛР-аналіз проводитися у таких випадках:

1. Діагностування ВІЛ-інфекції у новонароджених дітей, які з'явилися на світ від матері, зараженої СНІДом.
2. З метою контролю концентрації ВІЛ у крові пацієнта
3. Дослідження крові донора.

Навіть у разі, якщо ПЛР-дослідження покаже позитивний результат, то діагноз лише з такому тесту не ставиться. Найчастіше його використовують як додатковий метод для вирішення спірних ситуацій.

ПЛР-аналіз, на жаль, не можна назвати універсальним методом, проведення якого дає точні результати на наявність або відсутність інфекції в організмі людини. Це пов'язано з тим, що саме такий вид дослідження найчастіше інших методів дає хибнопозитивні результати. Такого методу діагностики вдаються при постановці діагнозу захворювання або під час проведення ВІЛ-інфекцію. Переважно його використовують як допоміжний метод діагностування СНІДу.

Однак, незважаючи на ймовірність хибнопозитивного результату, таке дослідження на ВІЛ має низку переваг перед іншими методами діагностики. Проводити ПЛР-аналіз можна вже на 11-15 день після дати передбачуваного зараження, а решта методів дозволяє оцінити наявність вірусу СНІДу в організмі людини лише через тривалий проміжок часу. Така розбіжність пояснюється тим, що більшість скринінгу тестів на ВІЛ ґрунтуються на визначенні до вірусу, освіта яких відбувається протягом трьох місяців.

Основною відмінністю ПЛР-дослідження від інших методів діагностики вважається той факт, що він виявляє не до вірусу, а наявність самого вірусу в організмі пацієнта.

Саме тому метод полімерну ланцюгову реакцію можна назвати ідеальною в тому випадку, якщо є необхідність проведення передчасного виявлення . Крім цього, вдатися до проведення такого методу можна у тому випадку, коли наявність антитіл не може бути достовірним показником.

Більше інформації про дослідження на ВІЛ можна дізнатись із відео.

За необхідності виявлення ступеня чи тяжкості патології в людини вдаються до проведення ПЛР-дослідження кількісним методом. Саме він дозволяє отримати інформацію про рівень концентрації інфекції в організмі хворого. Прогресування хвороби супроводжується поступовим збільшенням концентрації вірусу та кількісна ПЛР-діагностика дозволяє визначити стадію інфекції та ефективність проведеного. Діагностування «вірусного навантаження» до виявлення хвороби та після проведення лікування дозволяє зробити висновок про те, наскільки ефективно проводитись лікування.

Інші методи діагностики на ВІЛ

На сьогоднішній день діагностика ВІЛ-інфекції є стандартною процедурою, яка передбачає застосування різних видівдіагностики:

ІФА тест-системи

Проведення такого скринінгового тесту дозволяє виявити вірус вже за кілька тижнів після його проникнення в організм людини. Таке дослідження спрямоване не на визначення присутності вірусу у пацієнта, а на діагностуванні вироблення антитіл до нього. Вирізняється кілька поколінь ІФА-тестів, кожна з яких має різну чутливість. Такий тест іноді дає результати, що пояснюється неправильним проведенням обробки та наявністю в організмі пацієнта різних видів патологій.

Імунний блот

В тому випадку якщо імунний блотпоказує позитивний результат, можна говорити про постановку остаточного діагнозу ВІЛ. Основним способом його проведення є використання ніроцелюлозної смужки, яку нанесені білки вірусного походження.

Експрес-методи

Такою вважається новинкою в галузі діагностування ВІЛ-інфекції та оцінювати результат можна вже за кілька хвилин після їх проведення. Найбільш точні та достовірні результатидають імунохроматографічні тести, застосування яких ґрунтується на принципі капілярного струму.

Говорити про наявність в організмі ВІЛ-інфекції можна лише після підтвердження тестів ІФА аналізом ІБ.

Діагностування ВІЛ-інфекції в організмі людини вносить суттєві зміни до його звичного способу життя та відносин з оточуючими. Обов'язком медичного персоналу є збереження результатів аналізів, і лише сам пацієнт приймає рішення про те, кому повідомити про своє захворювання. ПЛР є одним з діагностичних методів, що дозволяють виявити присутність вірусу в організмі людини всього за кілька тижнів.

ПЛР (полімеразна ланцюгова реакція) являє собою метод молекулярної генетики, який дозволяє аналізувати будь-яку коротку послідовність ДНК (або РНК) навіть у зразках, що містять тільки дрібні кількості ДНК або РНК, тим самим визначивши наявність/відсутність патогенного збудника (визначити, наприклад, чи є в людині вірус ВІЛ або гепатиту Б або мікобактерії туберкульозу). ПЛР використовується для відтворення/множення/клонування (ампліфікації) вибраних ділянок ДНК або РНК для аналізу.

Метод ПЛР настільки простий, що його може поставити навіть школяр)

Раніше ампліфікація ДНК включала клонування сегментів, що становлять інтерес, у вектори для експресії в бактеріях і займала тижні. Але тепер, коли ПЛР робиться у пробірках, потрібно всього кілька годин. ПЛР є високоефективною, Так що з ДНК може бути зроблено величезну кількість копій.

Послідовність ДНК та відповідність нуклеотидів.

Хай не збідніє рука того, хто дає

Проект «СНІД.ВІЛ.ЗПСШ.» — некомерційний, створений добровольцями-експертами в галузі ВІЛ/СНІДу за рахунок власних коштів, щоб донести правду людям і бути чистими перед своєю професійною совістю. Будемо вдячні за будь-яку допомогу проекту. Хай віддасться Вам у тисячі разів: ПОЖЕРТВУВАТИ .

Більш того, ПЛР використовує ті ж молекули, які природа використовує для копіювання ДНК:

• Два «праймери», коротких одноланцюгових послідовностей ДНК, які синтезуються так, щоб відповідати початку та кінцю розтягування ДНК, що підлягає копіюванню.
• Фермент, званий полімеразою, що переміщається вздовж сегмента ДНК, зчитує його код і збирає копію.
• Купа блоків ДНК, які необхідно зробити цій полімеразі.

Тобто ПЛР - це така техніка, при якій частки ДНК (іноді РНК) множаться у певному розчині або на спеціальній поверхні, де вони можуть бути депоновані.

ПЛР - це метод, за допомогою якого вчені можуть знаходити голку в стозі сіна і потім будувати стог з цих голок.

завдання ПЛР як методу — помножити (ампліфікувати), зробити якнайбільше їх копій, щоб можна було ідентифікувати кому вони можуть належати (певній людині, тварині чи патогенному організму), навіть якщо є лише сліди наявності ДНК/РНК.

Однак ПЛР-ампліфікація є лише частиною діагностичного тесту. Після проведення ампліфікації ампліфіковані сегменти необхідно порівняти з іншими нуклеотидними сегментами, але вже з відомого джерела(наприклад, конкретної людини, тваринного чи патогенного організму). Це порівняння унікальних сегментів часто виконується шляхом розміщення нуклеотидних послідовностей, згенерованих ПЛР, поряд з відомими нуклеотидними послідовностями людей, патогенів або інших джерел у спеціальному гелі.

Коли електричний струм проходить через гель, то різні нуклеотидні послідовності утворюють смуги, які нагадують «сходи» відповідно до їх електричним зарядомта молекулярним розміром. Це називається гель-електрофорез. Вони мігрують на ті самі рівні в гелі, показуючи ідентичність нуклеотидних послідовностей. Цей метод є одним із найпопулярніших останніх етапів ПЛР-тестів.

Як ПЛР працює?

У 1983 році Карі Мулліс розробив основні етапи ампліфікації ДНК-послідовностей. Він і Майкл Сміт були удостоєні Нобелівської преміїза створення ПЛР у 1993 році.

ПЛР проводиться в одній пробірці з відповідними хімічними речовинамиі за певної температури нагрівання.

Необхідні наступні реагенти або хімікати:

• Зразок, що містить нуклеотидну послідовність (з крові, волосся, гною, шкіри тощо).
• ДНК-праймери: коротка одноланцюгова ДНК, яка приєднана до нуклеотидних послідовностей, що сприяє синтезу комплементарного ланцюга нуклеотидів.
• ДНК-полімераза: фермент, який, коли ДНК зв'язується з праймером, спускається фрагментом ДНК з додаванням структурних блоків ДНК для утворення комплементарних пар основ і, таким чином, синтезує комплементарний нуклеотидний ланцюг ДНК (введення термостійкої ДНК-полімерази, Taq-полімерази, отриманої з термостійких бактерій, що помітно покращує здатність до ПЛР).
• Великий надлишок структурних блоків ДНК, званих нуклеотидами (аденін, тимідин, цитозин та гуанін, скорочені як: A, T, C та G відповідно) у розчині. Коли ці блоки з'єднані разом, вони утворюють нуклеотидну послідовність або одну нитку ДНК. Коли ці будівельні блоки пов'язують свій комплементарний будівельний блок слабкими водневими зв'язками (наприклад, A буде зв'язуватися тільки з T і G тільки з C) утворюється нуклеотидна комплементарна послідовність ДНК, яка пов'язана з вихідною одноланцюгової ДНК. Коли зв'язування завершується, комплементарна ДНК з подвійним ланцюгом утворюється у певній послідовності.

Карі Мулліс дуже цікавий, прикольний дядечко, подивіться як він цікаво розповідає, як він придумав ПЛР:

Він вірить в астрологію, але не вірить, що ВІЛ викликає СНІД.

Потім полімеразно-ланцюгова реакція починається з сегмента ДНК зі зразка, який міститься в пробірку із зазначеними вище реагентами. Розчин нагрівають до 94°С. Нагрівання руйнує водневі зв'язки, які дозволяють утворювати комплементарні ланцюги ДНК, тому в суміші існують лише поодинокі нитки (це називається денатурацією дволанцюгової ДНК).

Суміші дають охолонути до 54°C. При цій температурі ДНК-праймери та ДНК-полімераза зв'язуються з окремою одноланцюжковою ДНК (це називається відпалом ДНК). Оскільки будівельні блоки в надлишку (висока концентрація) у суміші, полімераза використовує їх для створення нових комплементарних ниток ДНК (званих розширенням ДНК), і цей процес відбувається швидше при 72°C. Цей процес створює нову дволанцюгову молекулу ДНК з кожної з одиночних ниток вихідної молекули.

Цей цикл повторюється приблизно 40 разів у машині, яка називається термічним циклером (термосайклером), який автоматично повторює цикли нагрівання-охолодження, при цьому кількість кожної послідовності ДНК подвоюється щоразу, коли цикл нагрівання-охолодження завершується. Те, що спочатку було одним коротким сегментом ДНК, можна було збільшити приблизно до 100 мільярдів копій після 40 циклів подвоєння.

Коли потрібний тест на ПЛР?

Тест на ПЛР є основою для низки тестів, які можуть відповідати на багато різних медичних питань, які допомагають лікарям діагностувати та лікувати пацієнтів. Наприклад, тести ПЛР можуть виявляти та ідентифікувати патогенні організмиу пацієнтів, особливо тих, які важко культивувати (наприклад, ВІЛ та інші віруси та деякі гриби).

Одні лікарі призначають ПЛР-тести, щоб допомогти діагностувати генетичні захворювання, в той час як інші лікарі використовують ПЛР для виявлення біологічних споріднених відносин, таких як ідентифікація батьків дітей. ПЛР-тести також використовуються для ідентифікації та характеристики генетичних мутаційі перегрупувань, виявлених за певних ракових захворюваннях.

Тим не менш, ПЛР-тести були модифіковані та впроваджені в багато аспектів наукових досліджень, включаючи еволюційну біологію, генетичний відбиток пальців, судово-медичні дослідження та багато інших.

Що таке ВІД-ПЛР?

Зворотно-транскриптазний ПЛР (RT-PCR) - це тест на ПЛР, який призначений для виявлення та вимірювання кількості РНК. Хоча початкові тести ПЛР ампліфікували ДНК, багато вірусів та інші біологічні компоненти (наприклад, мітохондрії) використовують РНК як свій генетичний матеріал. RT-PCR відрізняється від звичайної ПЛР спочатку взяттям РНК і перетворенням нитки РНК на нитку ДНК. Це робиться по суті тим самим методом для ПЛР, описаним вище, за винятком використання ферменту, званого зворотної транскриптазою, замість ДНК-полімерази.

Зворотна транскриптаза дозволяє перевести одну нитку РНК у комплементарний ланцюг ДНК. Як тільки ця реакція відбувається, рутинний метод ПЛР можна використовувати для ампліфікації ДНК. RT-PCR використовується для виявлення та вивчення багатьох РНК-вірусів. RT-PCR не слід плутати з іншим варіантом ПЛР, що називається ПЛР в реальному часі (реал-тайм).

ПЛР в реальному часі є варіацією ПЛР, яка дозволяє аналізувати ампліфіковану ДНК протягом звичайних 40 циклів процедури. Хоча процедура аналогічна звичайній ПЛР з циклюванням, ПЛР реального часу використовує флуоресцентні барвники, прикріплені до деяких будівельних блоків або невеликих нуклеотидних ниток. Залежно від методу, що використовується, флуоресценція виникає, коли утворюються ампліфіковані нитки ДНК. Кількість флуоресценції можна виміряти протягом 40 циклів та дозволяє дослідникам вимірювати певні продукти та їх кількості під час циклів ампліфікації.

Це часто дозволяє дослідникам або технічним фахівцям пропускати гель-електрофорез або інші вторинні процедури, необхідні для аналізу продуктів ПЛР, забезпечуючи тим самим швидші результати. ПЛР у реальному часі та RT-PCR є варіаціями або модифікаціями вихідного тесту ПЛР. Тим не менш, існує ще багато варіантів (не менше 25), які існують та використовуються для вирішення конкретних проблем. Всі вони мають різні назви, такі як збірка ПЛР, ПЛР з гарячим початком, мультиплексна ПЛР, твердотільна ПЛР та багато інших.

Що таке ПЛР аналіз на ВІЛ?

ПЛР(полімеразна ланцюгова реакція) - метод множення генетичного матеріалу вірусу, аналіз, який визначає генетичний матеріалвірусу- РНК чи ДНК ВІЛ.

Якщо вірус міститься у мінімальному значенні, то результаті реакції ця кількість багаторазово збільшується. Тому ПЛР має високе діагностичне значення.

Зазвичай цей тест використовується для визначення ВІЛ у донорській кровіабо для раннього визначення наявності ВІЛв організмі до вироблення специфічних антитіл до ВІЛ. Специфічні антитіла визначають звичайні тести на ВІЛ (ІФА), але через 1-3, рідко 12 місяців після зараження. А за допомогою ПЛР можна дати досить точну відповідь через 14 днівз достовірністю 98% і навіть за 5 днів, але тоді достовірність буде 80%. ПЛР на ВІЛ - це дорогий і трудомісткий аналіз, ніж ІФА, тому його використовують не всім підряд, а лише за особливими показаннями (донори, які постраждали від медичної аварії з ВІЛ-інфікованим) або платно.

Якісний ПЛР аналіз на ВІЛ- Визначає є вірус ВІЛ-1/ВІЛ-2 або його немає, але він не визначає кількість копій вірусу (для визначення кількості використовується кількісний ПЛР). Якісний ПЛР не роблять тим, у кого відомий діагноз «ВІЛ-інфекція». Його роблять лише тим, у кого поки що невідомо, чи інфікований він ВІЛ чи ні.

Це метод визначення компліментарної ділянки ДНК у геномі клітини лімфоциту ураженого ВІЛ. Тобто. визначається не сам вірус, а матеріал, який вірус вбудовує у клітину. У ядрі клітини вже зберігатиметься його ДНК з якої він потім зчитуватиметься і розмножуватиметься (копіюватиме самого себе).

Кількісний ПЛР аналіз на ВІЛ

Кількісний ПЛР аналіз на РНК ВІЛ- Визначає кількість копій РНК вірусу в крові (для визначення вірусу в клітинах використовують ПЛР ДНК, наприклад у дітей). Робиться лише у ВІЛ-інфікованихдля контролю лікування, визначення виразності процесу розвитку хвороби, ефективності лікування.

Через скільки часу після зараження можна знайти ВІЛ за допомогою методу ПЛР?

Через скільки днів можна здавати ПЛР на ВІЛ після контакту із ВІЛ позитивним партнером?

ВІЛ за допомогою ПЛР можна виявити через 4-14 днів після зараження. Негативний результат ПЛР на ВІЛ достовірний після 14 днів після ризикованого контакту, але за чинними нормативами потрібне обстеження за допомогою .

Чим відрізняється ПЛР ДНК від ПЛР РНК ВІЛ?

РНКзазвичай використовується в кількісних тестах з метою оцінки вірусного навантаження у діагностованих осіб, наприклад, з метою оцінки ефективності терапії.

ДНК- у мононуклеарних клітинах, наприклад, для діагностики у дітей, там, де антитіла до ВІЛ матерів заважає використовувати метод ІФА.

І той, і інший тест можуть бути і кількісними, і якісними.

І той, і інший можна в окремих випадках застосувати діагностики, але з урахуванням конкретних обмежень, які накладають технічні характеристикисистеми, тобто. за призначенням лікаря.

Чи може ПЛР на ВІЛ бути хибнопозитивним, причини?

Якщо все зроблено правильно: медсестра не переплутала пробірки, подивилася паспорт, перш ніж робити забір крові, правильно промаркувала пробірку, правильно виписала направлення і т.д., а фахівець лабораторії (зазвичай це лікар-лаборант) зробив все згідно з інструкцією, ним були дотримані всі вимоги лабораторного. регламенту (наприклад, правильно «розскапав» біоматеріал, без перехресної контамінації (забруднення) і т.д.) і була використана якісна тест-система, ТО ПЛР хибнопозитивним може бути тільки в 2% випадках (це пов'язано з чутливістю використовуваних тест-систем) .

Але якщо були допущені помилки з боку медичного персоналуустанови , ТО ПЛР може бути хибнопозитивним, більш ніж у 2% випадків.

Як здається ПЛР на ВІЛ?

Для дослідження на ВІЛ методом ПЛР здається кров із вени, бажано (але необов'язково) вранці натще.

Де можна здати аналізи на ПЛР ВІЛ?

Для цього потрібно ввести в пошук Вашого браузера. здати пцр віч»та додати у запит Ваш населений пункті Ви побачите організації, які займаються у вас дослідженнями на ПЛР.

Наприклад,

Скільки коштує аналіз на ВІЛ методом ПЛР?

Біля 1,5-3 тис. руб.залежно від регіону.

Якою є достовірність результатів ПЛР аналізу на ВІЛ?

Через 14 днівпісля зараження достовірність ПЛР на ВІЛ становить 100%, з 4-5 днів – достовірність 80%.

Скільки часу проводиться аналіз ПЛР на ВІЛ?

Технічно 4-6 годин, але насправді залежить від організації роботи лабораторії і зазвичай результат видається через 2-3 дні.

ПЛР на ВІЛ у новонародженої дитини

Так як у дитини до 1,5 років народженої від ВІЛ+ матері зберігаються її антитіла проти ВІЛ, то визначити заражена ВІЛ дитина чи ні за допомогою ІФА неможливо. У такій ситуації використовується ПЛР:

• Якщо у дитини віком 1 міс за допомогою ПЛР виявили вірус, то вона заразилася.
• Якщо у дитини в 1-2 місяці та 4-6 місяців ПЛР негативна, то за умови, що мати не годувала її своїм грудним молоком – дитина здорова.

У чому різниця між ПЛР та ІФА?

ПЛР визначає сам вірус, а ІФА реакцію (у вигляді антитіл) організму на вірус.

ПЛР швидше визначає наявність вірусу, ніж ІФА.